Комплет за PCR во реално време за вирусот на мајмунски сипаници
Детали за производот
Наменска употреба
Се користи за откривање на вирусот на мајмунска сипаница во примероци од човечки серум или ексудат од лезија со користење на PCR системи во реално време.
Принцип на тест
Овој производ е флуоресцентен систем за анализа на PCR во реално време Taqman® базиран на сонда.Специфични прајмери и сонди се дизајнирани за откривање на F3L генот на вирусот Monkeypox.Внатрешната контрола која го таргетира човечкиот зачуван ген го следи собирањето на примерокот, ракувањето со примерокот и процесот на PCR во реално време за да се избегнат лажно-негативни резултати.Комплетот е целосно премикс лиофилизиран систем, кој вклучува материјали потребни за откривање на вирусот на мајмунски сипаници: ензим за засилување на нуклеинската киселина, ензим UDG, реакционен пуфер, специфичен прајмер и сонда.
Главна содржина
Обезбедените компоненти се наведени во табелата.
| Компоненти | Пакет | Состојка |
| Вирус на мајмунски сипанициЛиофилизиран премикс | 8 ленти PCR цевки× 6 торбички | Прајмери, сонди, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA полимераза, UDG ензим |
| Позитивна контрола на MPV | 400 μL×1 цевка | ДНК секвенци кои содржат Целен ген |
| MPV Негативна контрола | 400 μL×1 цевка | ДНК секвенци кои содржат човечки генски сегмент |
| Растворувачки раствор | 1 mL×1 цевка | Стабилизатор |
| Сертификат за сообразност | 1 парче | / |
Проток на операција
1. ПримерокКолекција:Примерокот треба да се собере во стерилни цевки во согласност
со стандардни технички спецификации.
2. Подготовка на реагенс (област за подготовка на реагенс)
Извадете ги компонентите од комплетот, избалансирајте ги на собна температура за употреба во режим на подготвеност.
3. Обработка на примероци (област за обработка на примероци)
3.1 Екстракција на нуклеинска киселина
Се препорачува да се земат течни примероци од 200μL, Позитивна контрола и Негативна контрола за екстракција на нуклеинска киселина, според соодветните барања и процедури на комплетите за екстракција на вирусна ДНК.
3.2 Лиофилизиран прав растворање и додавање шаблон
Подгответе го лиофилизиран премикс со вирус на сипаници според бројот на примероци.На еден примерок му е потребна една ПЦР епрувета која содржи лиофилизиран премикс прашок.Негативната контрола и позитивната контрола треба да се третираат како два примероци.
(1) Додадете 15 μL раствор за растворање во секоја PCR епрувета што содржи лиофилизиран премикс, а потоа додадете 5 μL извлечени примероци/Негативна контрола/Позитивна контрола во секоја PCR цевка соодветно.
(2) Цврсто покријте ги цевките за ПЦР, движете ги ПЦР цевките со рака додека лиофилизираниот прав целосно не се раствори и измеша, соберете ја течноста до дното на ПЦР цевките со моментална центрифугирање со мала брзина.
(3) Ако користите заеднички инструмент за откривање во реално време за PCR, тогаш директно префрлете ги ПЦР цевките во областа за засилување;ако користите BTK-8 за откривање, тогаш треба да ги извршите следните операции: префрлете 10 μL течност од PCR цевката во бунарот за реакционен чип на BTK-8.Една ПЦР цевка одговара на еден бунар на чипот.За време на работата со пипетирање, проверете дали пипетата е вертикална 90 степени.Врвовите на пипетата со бариера за аеросол треба да се постават во центарот на бунарот со умерена сила и да престанат да ја туркаат пипетата кога ќе стигне до првата брзина (за да се избегнат меурчиња).Откако ќе се наполнат бунарите, извадете мембрана за реакционен чип за да ги покриете сите бунари и чипот потоа се пренесува во областа за детекција на засилување.
4. PCR засилување (површина за откривање)
4.1.
4.2 Поставки за детекција на флуоресценција: (1) вирус на сипаници (FAM);(2) Внатрешна контрола (CY5).
4.3 Вклучете го следниов протокол за возење велосипед
Протокол на ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Чекори | Температура | Време | Циклуси | |
| 1 | Пред денатурација | 95 ℃ | 2 мин | 1 |
| 2 | Денатурација | 95 ℃ | 10 с | 45 |
| Греење, продолжување, стекнување флуоресценција | 60 ℃ | 30 с | ||
Протокол на БТК-8:
| Чекори | Температура | Време | Циклуси | |
| 1 | Пред денатурација | 95 ℃ | 2 мин | 1 |
| 2 | Денатурација | 95 ℃ | 5 с | 45 |
| Греење, продолжување, стекнување флуоресценција | 60 ℃ | 14 с | ||
5. Анализа на резултати (ве молиме погледнете го прирачникот за корисникот на инструментот)
По реакцијата, резултатите ќе се зачуваат автоматски.Кликнете на „Analyze“ за да анализирате и инструментот автоматски ќе ги интерпретира вредностите на Ct на секој примерок во колоната со резултати.Негативните и позитивните контролни резултати треба да се усогласат со следново „6. Контрола на квалитет“.
6. Контрола на квалитет
6.1 Негативна контрола: Нема Ct или Ct>40 во FAM канал, Ct≤40 во CY5 канал со нормална крива на засилување.
6.2 Позитивна контрола: Ct≤35 во FAM канал со нормална крива на засилување, Ct≤40 во CY5 канал со нормална крива на засилување.
6.3 Резултатот е валиден доколку се исполнети сите горенаведени критериуми.Во спротивно, резултатот е неважечки.
Толкување на резултатот
Следниве резултати се можни:
| Ct вредност на FAM каналот | Ct вредност на CY5 канал | Толкување | |
| 1# | Без Ct или Ct>40 | ≤40 | Негативен вирус на мајмунски сипаници |
| 2# | ≤40 | Било какви резултати | Вирусот на мајмунски сипаници е позитивен |
| 3# | 40-45 | ≤40 | Повторен тест;ако сеуште е 40~45, пријави како 1# |
| 4# | Без Ct или Ct>40 | Без Ct или Ct>40 | Неважечки |
ЗАБЕЛЕШКА: Ако се појави неважечки резултат, примерокот треба да се собере и повторно да се тестира.
Информации за нарачка
| Име на производ | Мачка.бр | Големина | Примерок | Рок на траење | Транс.& Сто.Темп. |
| Комплет за PCR во реално време за вирусот на мајмунски сипаници | B001P-01 | 48 тестови/комплет | Серум/Ексудат на лезија | 12 месеци | -25-15℃ |
